价格:460
货号Bsh1236I (BstUI)
产品详情
产品详情
产品信息
|
产品编号 |
|
Bsh1236I (BstUI) |
HRF0455 |
产品描述
本公司生产的快速内切酶Bsh1236I (BstUI)是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。
color reaction buffer 包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。color reaction buffer 的红色染料与 2500 bp 双链DNA片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10bp 双链DNA片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
应用方向
1.1× reaction Buffer缓冲液，37℃孵育。
2. 参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
产品组成
|
组分 |
规格 |
|
Bsh1236I |
50 μl |
|
10×reaction buffer |
1ml |
|
10×color reaction buffer |
1 ml |
失活条件
80℃温育 20 min。
质量控制
功能活性检测:
37℃下，在 20 μl 通用 reaction buffer 反应体系中，1 μl Bsh1236I 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA。
超长时间温育检测:
37℃下，在 20 μl 通用 reaction buffer反应体系中，将 1 μl Bsh1236I 与 1 μg λDNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或 星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测:
37℃下，使用 10 倍酶量的 Bsh1236I 消化 DNA 底物， 回收酶切产物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将 ~50% 的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可 以重新切开约 95% 以上的连接产物。
使用方法
1、DNA 快速酶切流程
① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
| 试剂 | 质粒 DNA | PCR 产物 | 基因组 DNA |
| ddH2O | 15 μl | 16 μl | 30 μl |
| 10× reaction buffer 或 10×color reaction buffer | 2 μl | 3 μla | 5 μl |
| 底物 DNA | 2 μl (up to 1 μg) | 10 μl (~0.2 μg) | 10 μl (5 μg) |
| Bsh1236I | 1 μl | 1 μl | 5 μl |
| Total | 20 μl | 30 μl | 50 μl |
a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10× reaction buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有 外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。
② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
③ 37℃温育 15 min（质粒），或 15~30 min（PCR 产物），或 30~60 min（基因组 DNA）；
④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）；
⑤ 如果使用 color reaction buffer 进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。
2、双酶切或多酶切
① 每种快速内切酶的用量为 1 μl，并根据需要适当扩大反应体系；
② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10；
③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切 反应。
3、适用于质粒的扩大反应体系:
| DNA | 1 μg | 2μg | 3μg | 4μg | 5 μg |
| Bsh1236I | 1 μl | 2 μl | 3μl | 4 μl | 5 μl |
| 10× reaction buffer 或 10× ×color reaction buffer | 2 μl | 2 μl | 3μl | 4 μl | 5 μl |
| Total | 20 μl | 20 μl | 30 μl | 40 μl | 50 μl |
注：如果总反应体系大于 20 μl，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
不同 DNA 中的酶切位点数量:
| λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
| 157 | 14 | 23 | 11 | 10 | 0 | 19 | 303 |
甲基化修饰影响:
| Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
| 无影响 | 无影响 | 剪切受阻 | 无影响 | 无影响 |
注意事项
1.Bsh1236I (BstUI) 和 BstUI 是 同 裂 酶， 在 60 ℃ 时 活性百分百，但在 60℃时不再兼容 FastDigest Buffer 和 QuickCut Buffer，必须使用 reaction buffer，以保证反应正常进行。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3.本产品仅作科研用途！
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。