• 说明书丨HRQ0541-植物基因组DNA快速提取试剂盒.pdf

产品信息:

产品简介：

     该试剂盒采用DNA吸附柱和特殊的溶液系统，适用于适合从各种新鲜的植物组织中快速提取到高质量的基因组 DNA。在60分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

    新鲜或干燥的植物样本经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗、离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

      通常情况下，每100mg新鲜组织组织可获得1-25μg的高纯度的基因组DNA（实际可能因样品的不同而导致DNA产量的不同）。

储存事项：

1）本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2）试剂盒储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品特点：

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂.

2.简捷，单个样品操作一般可在60分钟内完成。

3.适应性比较广泛，可以提取包括拟南芥、小麦、松树、马铃薯、玉米、大豆、水稻、烟草、油菜、番茄等各类植物样本的DNA。

4.多次柱漂洗确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀ 典型的比值高达 1.7～1.9，长度可达30kb-50kb，

可直接用于PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。

产品组分：

使用前必读：

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机。

2、样本应该避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。

3、Buffer LP1可能发黄，并不影响使用。

4、若Buffer LP1和LP2有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。

使用方法：

提示：

→第一次使用前请先在在 Buffer LP3，Buffer PW中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

1、处理材料:

取植物新鲜组织100 mg或干重组织20 mg，加入液氮充分碾磨。加入400 μL Buffer LP1和6μL RNase A（10 mg/mL），旋涡振荡1 min，室温放置10 min。

2、处理材料:取植物新鲜组织  200  mg 或干重组织  40  mg ，加入液氮充分碾磨 。加入 500  μL Buffer LP1 裂解30min（中间每5min振荡混匀1min）【如果难裂解样本，可以适当增加裂解时间】。

3、放入离心机，12000rpm离心5min，将上清液全部移至新的离心管中加入 6 μL  RNase A（  10   mg/mL ） ，旋涡振荡  1  min ，室温放置  10   min。

4、加入  163μL  Buffer  LP2  ，充分混匀 ，旋涡振荡  1 min。 12,000  rpm 离心 5  min ，将上清移至新的离心管中。

5 、加入上清液  1.5  倍体积的  Buffer  LP3（例如  500μL 的上清液加 750μL 的  Buffer  LP3） （使用前请先检查是否已加入无水乙醇！ ） ，立即充分振荡混匀  30 秒  ， 此时可能会出现絮状沉淀。

6 、 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱中 （吸附柱放入收集管中）  ， 12, 000  rpm离心30 秒 ，倒掉废液  ， 吸附柱放回收集管中。

7 、 向吸附柱中加入  600μL 漂洗液  Buffer  PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇！ ） ， 12,000

rpm 离心 30 秒  ，倒掉废液 ，将吸附柱放入收集管中。

8、重复步骤 7。

9、将吸附柱放回收集管中 ， 12,000  rpm离心 2 分钟 ，倒掉溶液 ，将吸附柱置于室温  5 分钟 ， 以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液  Buffer  PW。

10 、 将吸附柱装入一个干净的离心管中  ，  向吸附柱的中间部位悬空滴加  50-200μL  的洗脱缓冲液Buffer TE ，室温放置  2-5min ， 12,000rpm 离心 2 分钟  ，将溶液收集到离心管中 ，获得  DNA。

注意 ： 为了增加  DNA 得率  ， 可以将步骤  10 离心得到的溶液再次加入吸附柱中  ， 室温放置  2 min， 12, 000rpm离心  2 分钟 。 洗脱液不应该少于  50μL  ， 体积过小影响回收效率。

DNA浓度及纯度检测

得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/mL双链DNA、40μg/mL单链DNA。

OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH₂O，比

值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

产品仅用于科研等非医疗用途！