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产品信息

产品描述

本公司生产的Sacll酶是通过基因重组表达获得的快速限制性内切酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。

酶切位点

5' C C G C ↓ G G 3'

3' G G ↑ C G C C 5'

同裂酶：Cfr42I，KspI，Sfr303I，SgrBI

注意事项

1. SacII 活性受到高浓度盐的抑制，请避免使用含有高浓度盐的底物进行切割；
2. SacII 难以切割某些位点，如 λDNA 右臂上的 SacII 位点；
3. SacII 需要作用于两个识别序列才能进行高效酶切。因此，底物只有单个 SacII 位点时，其切割速度会减慢。

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存 2 年

产品组成

使用方法

1.DNA快速酶切过程

1）在冰上配制以下反应体系：

1. 本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×Reaction Buffer 加入量可适当减少至2ul。但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。

• 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；、
• 37℃温育 15 min（质粒），或 15~30 min（PCR 产物），或 30~60 min（基因组 DNA）；
• 80℃ 温育20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）；
• 如果使用Color Reaction Buffer 进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。

 2.双酶切或多酶切

1）每种快速内切酶的用量为1μl，并根据需要适当扩大反应体系；

2）所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；

3）如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

 3.适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于 20 μl，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。