• 说明书丨HRN0544-CTAB植物基因组DNA快速提取试剂盒.pdf

产品信息

产品描述

      改进的经典CTAB植物DNA抽提液内（添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质（根据需要，上清中还加入异丙醇离心沉淀基因组DNA，进一步去除其它各种杂质），然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

产品组分

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

产品特点

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。

4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

适用范围

适用于快速提取植物基因组DNA

运输和保存方法

1）裂解液PL、或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在55℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。结合液PQ盐酸胍浓度高，加入乙醇后可能出现一些沉淀不影响使用，直接取上清用。

2）避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项

1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。

3.需要自备氯仿或者氯仿/异戊醇（体积比24：1混合）、无水乙醇和β-巯基乙醇。

4.结合液PQ 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5.不同来源的植物组织材料中提取DNA的量会有差异,一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。

6.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0）,但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

7.本试剂盒是按照标准提取过程配置各溶液体积，如果样品DNA含量低或者产量低，需要扩大提取量，还需要另外购买溶液。

8.本产品仅作科研用途！

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在漂洗液WB和结合液PQ中加入指定量无水乙醇!充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

→取所需适量裂解液PL放置在65℃预热，使用前加入β-巯基乙醇到终浓度2%。

1.取适量植物组织（新鲜组织100 mg 或干重组织30 mg）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

2.转移细粉到一个1.5mL离心管，不要解冻，加600μL 65℃预热的裂解液PL (确认已加入β-巯基乙醇至2%)和和5μL RNase A(10 mg/mL)，剧烈涡旋振荡混匀，用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解。

如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。

注：如果最后提取的DNA残留RNA较多导致或者电泳时候条带拖尾，条带扭曲，背景很高，等不正常电泳情况，可以加1% RNA酶（10mg/mL）37℃或者室温放置半小时即可消化RNA，消化完后不需要特殊处理便可用于PCR或者酶切。

3.65℃水浴20-60分钟，在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。

4.加入700μL氯仿或者氯仿/异戊醇（体积比24：1混合），颠倒充分混匀几分钟（或者涡旋混匀），13,000rpm 离心5分钟。

若提取的植物组织富含多糖多酚，可以在第4步前用等体积酚/氯仿（1：1）抽提一遍。

5.小心吸取上清到一个新的1.5mL离心管，注意不要吸到界面物质。

如上清比较浑浊，则需要重复步骤4一遍，直到得到透亮上清。

6.较精确估算上清量，加入1.5倍体积结合液PQ （请先检查是否已加入无水乙醇!）后立刻涡旋，充分混匀。此时可能出现沉淀，但不影响实验结果。

7.将上一步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液（先加700μL离心，弃废液，再加入剩余的溶液，再次离心）。

8.加入500μL抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。

9.加入600μL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

10.加入600μL漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

11.将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

12.取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热），室温放置3-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果预计和需要产量高，可增大洗脱体积，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

13.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。