• 说明书丨免疫染色试剂(Polymer-HRP 羊抗鼠兔二抗试剂盒）.pdf

产品信息

产品描述

本试剂基于免疫组织化学检测原理：切片经抗原热修复后不一抗试剂进行孵育， 在原位形成一抗不目标抗原的抗原-抗体复合物；抗原-抗体复合物中一抗分子再 不辣根过氧化物酶（HRP）标记的聚合物二抗通过孵育结合，在原位进一步形成 抗原-抗体-二抗聚合物的复合物；最后通过 HRP 催化二氨基联苯胺（DAB）在 抗原部位形成棕色沉积物。光学显微镜下通过观察棕色部位来确定是否有目标抗 原及其表达情况。

样本要求

      取材的组织样本离体后，应立即浸泡在 10%中性福尔马林固定液中固定，固定 时间为 12-72 小时。后经过脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋并制成蜡块。组织蜡 块应切成厚度为 3-4μm 的组织切片，黏附在多聚赖氨酸玱片上，经常觃烤片后， 放置冷却至室温。样本组织切片制备后保存条件为避光、室温，为了良好地重现 组织中抗原分布情况，要在 30 天内完成染色。

使用方法

1、 常觃处理石蜡或冰冻组织切片或细胞爬片等待检测样品，至水化步骤；

2、 切片充分甩干后加内源性过氧化物酶阻断剂 50-100 ul，湿盒中室温孵育 30 分钟；或者浸泡在内源性过氧化物酶阻断剂中 15-30 分钟；

3、 PBST 浸洗 3 分钟，重复 1-2 次；

4、 滴加适量一抗工作液（商品化即用型抗体或适当比例稀释的浓缩抗体），按 实验要求孵育；

5、 PBST 浸洗 5 分钟，重复 3-5 次；

6、 切片充分甩干后加 Polymer-HRP 羊抗鼠/兔二抗试剂 50-100 u（l 约 1 滴）， 湿盒中室温孵育 30 分钟； 7、 PBST 浸洗 5 分钟，重复 3-5 次；

8、 DAB 或者 AEC 显色（根据 DAB 或 AEC 显色试剂盒操作说明）；

9、 复染、脱水、透明、封片、镜检。

检测方法

1、组织切片脱蜡-水化-去内源性过氧化氢酶-抗原修复-封闭-抗体孵育-DAB 显 色-苏木素复染-分化返蓝-脱水-透明-封片-镜检。

2、 具体的实验方法参照《临床技术操作觃范·病理学分册》等相关觃范性文件。

3、 浓缩型需要进行抗体预实验摸索有效稀释比，即用型可直接用于检测实验。

4、为了保证检测结果的可靠性，每批实验建议同时设置阴阳性对照和空白对照。

结果判读

在阴阳性对照和空白对照显色正常的前提下：

阳性：组织切片中预期细胞阳性部位显棕色，无背景染色。

阴性：组织切片中预期细胞阳性部位无棕色染色。

检测方法局限性

1、 免疫组化前任一环节的丌觃范操作都可能影响最终的实验结果。

2、 与业的操作人员、经过认证的实验室将有助于实现检测过程的标准化，从而 减少由于各种外界因素造成的染色偏差。

3、 在免疫组化测试中如出现阴性结果，表示未检测出抗原，而丌是经测定的细 胞或者组织中丌存在该抗原。

注意事项

1）开始实验前，应仔细阅读此说明书。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！