• 说明书丨HRK2920-Enhanced ATP assay kit 增强型ATP检测试剂盒.pdf

产品信息

 产品描述

ATP 是生物体内能量转换最基本的载体，其含量的变化直接关系到各器官的能量代谢。ATP作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP 水平的改变，会影响许多细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP 水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内 ATP 水平。通常 ATP 水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时 ATP 水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生。ATP 含量测定试剂盒可以用于检测普通溶液、细胞或组织内的 ATP 水平。
      本试剂盒根据萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)催化荧光素产生荧光时需要 ATP 提供能量研制而成。当萤火虫荧光素酶和荧光素都过量时，在一定的浓度范围内荧光的产生和 ATP 的浓度成正比，这样就可以高灵敏地检测溶液中的 ATP 浓度。本试剂盒在样品体积为 100μL 时可以检测浓度低达 0.1nmol/L 的 ATP，检测上限可以高达 10μM，并在 0.1nmol/L-10μM 范围内可以形成良好的标准曲线。

产品组分

 运输和保存方式

干冰运输。 -20℃保存，有效期1年。

实验步骤

使用方法：
1. 样品测定的准备：(注意：样品裂解需在 4℃或冰上操作)：
对于贴壁细胞：
吸除培养液，按照 6 孔板每孔加入 200μL 裂解液的比例(即相当于细胞培养液量 2mL 的 1/10)加入裂解液，裂解细胞。裂解细胞时为了裂解充分，可以使用移液器进行反复吹打或晃动培养板使裂解液充分接触并裂解细胞。通常细胞在接触裂解液后会立即裂解。裂解后 4℃ 10000rpm 离
心 5 分钟，取上清，用于后续的测定。
对于悬浮细胞：
用离心管离心沉淀细胞，弃上清，轻轻弹散细胞，按照 6 孔板每孔的细胞量加入 200μL 裂解液的比例加入裂解液，裂解细胞。裂解细胞时为了裂解充分可以弹击离心管管底或适当 Vortex 使裂解液充分接触并裂解细胞。通常细胞在接触裂解液后会立即裂解。裂解后 4℃ 10000rpm 离心 5
分钟，取上清，用于后续的测定。
对于组织样品：
按照每 20 毫克组织加入约 100-200μL 裂解液的比例加入裂解液，然后用玻璃匀浆器或其它匀浆设备进行匀浆。充分匀浆可以确保组织被完全裂解。裂解后 4℃ 10000rpm 离心 5 分钟，取上清，用于后续的测定。
2. 标准曲线测定的准备：
冰浴上融解待用试剂，把 ATP 标准溶液用 ATP 检测裂解液稀释成适当的浓度梯度。具体的浓度需根据样品中 ATP 的浓度而定。初次检测可以检测 0.01、0.03、0.1、0.3、1、3 和 10μM 这几个浓度，在后续的实验中，可以根据样品中 ATP 的浓度对标准品的浓度范围进行适当调整。

3. ATP 浓度的测定：
(a) 加 100μL ATP 检测工作液到检测孔或检测管内。室温放置 3-5 分钟，以使本底性的 ATP 全部被消耗掉，从而降低本底。可以一次性把 10-20 个检测孔或检测管分别加上 100μL ATP 检测
工作液，从而节省时间。
(b) 在检测孔或检测管内加上 10μL 样品或标准品，迅速用枪(微量移液器)混匀，至少间隔 2 秒后，用化学发光仪(luminometer)或液闪仪测定 RLU 值或 CPM。(注：样品的体积可以自行在10-100μL 范围内调节。如果样品中的 ATP 浓度比较低则可以加入 100μL 样品，如果样品中
ATP 浓度比较高则可以加入较小体积的样品，同时标准品也需要使用相同的体积。如果样品中 ATP 的浓度特别高，可以用 ATP 检测裂解液稀释样品后再测定。本试剂盒在加入 10-100μL标准品时，大致在 1nM-10μM 的浓度范围内有很好的线性关系 。

注意事项

1.本试剂盒的检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。为取得良好的使用效果，第一次解冻后可适当分装保存，但需注意分装的容器不能有 ATP 污染。
2.荧光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前细胞和 ATP 检测试剂均需平衡至室温后再进行测定。请勿室温存放。
3.ATP，特别是裂解后样品中的 ATP 在室温不太稳定，需在 4℃或冰上操作。
4.检测时需使用适合于细胞培养的白色或黑色的 96 孔板或 384 孔板。如果使用普通透明的 96孔板或 384 孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。
5.本试剂盒提供的 ATP 检测裂解液可以有效裂解并释放常见的培养细胞和组织中的 ATP。对于一些特殊的组织或样品，如果发现检测出来的 ATP 水平显著低于预期水平，可以在裂解样品后并且在离心前，取部分样品煮沸 2 分钟以充分释放 ATP。煮沸后样品中的蛋白质会变性，从而会在后续的离心步骤中被沉淀，因此煮沸的样品不能用于蛋白浓度测定、SDS-PAGE 和Western 检测。可以使用剩余的部分样品进行蛋白浓度测定、SDS-PAGE 和 Western 检测。
6.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。