价格:500
货号HRbio™ High Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶
产品详情
产品详情
产品信息
|
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
|
HRbio™ High Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶 |
HRF0099 |
100 U |
|
HRF0100 |
500 U |
产品描述
HRbio™ High Fidelity DNA Polymerase是一款高保真 DNA 聚合酶，具有5′-3’聚合酶活性和3′-5’外切酶活性，能够读取和扩增含有尿嘧啶和次黄嘌呤的模板，能够扩增富含GC或AT的模板，能扩增低至1个拷贝的基因组，不同种属来源DNA模板均能扩增超过12 kb的片段。 使用HRbio™ High Fidelity DNA Polymerase 进行扩增，复杂的模板的扩增速度也能够达到15~30 sec/kb；多种模板在变性、退火和延伸皆为1sec的条件下，均能特异扩增2 kb产物。使用Sanger测序的方法进行检测，该酶突变率比Taq DNA聚合酶低56倍。使用本产品扩增得到的PCR产物为平滑末端。
产品组分
|
组分名称 |
规格 |
||
|
HRF0099 |
HRF0100 |
HRF0100X |
|
|
（100 U） |
（500 U） |
（1000 U） |
|
|
HRbio™ High Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL） |
100 μL |
5×100 μL |
10×100 μL |
|
5×HRbio™ PCR buffer （with Mg2+ ） |
1 mL |
5×1 mL |
10×1 mL |
|
5×Enhancer |
1 mL |
5×1 mL |
10×1 mL |
|
25mM MgSO4 |
500 μL |
5×500 μL |
10×500 μL |
|
10mM dNTP |
100 μL |
5×100 μL |
10×100 μL |
|
ddH2O(DNase/RNase Free) |
1 mL |
5×1 mL |
10×1 mL |
产品应用
1.高保真 PCR
2.基因克隆
3.生成测序模板
4.高 GC 含量 PCR
5.长片段 PCR（超过12 kb）
6.突变
7.高通量 PCR
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子 DNA 为模板/引物， 74℃ ，30 min 内，摄入 10 nmol 脱氧核苷酸摄入为酸不溶物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。
推荐PCR反应体系（冰盒上配制）
|
组分 |
体积（μL） |
注释 |
| 5×HRbio™ PCR buffer （with Mg2+ ） |
10 μL |
buffer中已经包含了10mM的MgSO4 [1] |
| 5×Enhancer |
10 μL |
根据需要调整用量[2] |
| Primer 正向 (10 μM) |
2 μL |
0.2-1μM |
| Primer 反向 (10 μM) |
2 μL |
0.2-1μM |
|
10mM dNTP |
1 μL |
0.2mM |
|
模板DNA |
1pg-10ng（质粒） 或10-250ng（基因组） |
|
| HRbio™ High Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL） |
1 μL |
0.5-2U[3] |
|
ddH2O |
补足到50μL |
|
PCR扩增程序
1、常规PCR扩增程序
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
98℃[4] |
1-3min[5] |
1 |
|
变性 |
98℃ |
10-15 sec[5] |
25-35 |
|
退火 |
Tm±3℃[6] |
10-30 sec[6] |
|
|
延伸 |
72℃ |
15-30 sec/kb |
|
|
终延伸 |
72℃ |
8 min |
1 |
【注】
[1]. 体系中已含有终浓度为2 mM Mg2+，如有需要，可用试剂盒中提供的25 mM MgSO4，以0.2~0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度，Mg2+的终浓度一般不超过3mM。
[2]. 针对部分复杂模板，可以根据需要在0-20 µl的范围内调整 5× Enhancer。
[3]. 建议在0.5-2U/50 µl范围内使用本聚合酶。由于该酶具有3’-5’外切酶活性，在使用时应最后加入反应体系，并立即进行反应。如需进行TA克隆的加A步骤，必须对PCR产物进行纯化。
[4]. PCR反应在冰上配制后，直接置于预热至80℃的PCR仪上进行反应，可增强PCR反应的特异性，减少非特异性扩增。
[5]. 大部分的模板预变性时间1 min，每个循环变性时间10 sec即可，部分复杂模板可以适当提高预变性时间到3min，每个循环变性时间15 sec。
[6].根据该酶反应体系的特性，为了获得更好的特异性，退火温度应尽量高于引物Tm值，在+3℃范围内即可。退火时间过长可能导致扩增产物呈弥散状。因此，推荐退火时间设置为10 sec。对于一些困难模板，退火时间可在10-30 sec之间调整。
长片段PCR扩增程序
本产品具有高特异性和长片段扩增能力，通常扩增超过12kb的片段，建议增加模板（基因组建议增加到100ng/50μL），降低循环中的变性温度，提高引物的Tm值（一般不超过68℃），延伸温度调整为68℃。如果有必要，以0.2-0.5mM为间隔向上摸索Mg2+最佳浓度。
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
94℃ |
3min |
1 |
|
变性 |
94℃ |
10-15 sec |
30-35 |
|
退火 |
Tm |
30sec |
|
|
延伸 |
68℃ |
30-60 sec/kb |
|
|
终延伸 |
68℃ |
8 min |
1 |
高GC片段PCR扩增
使用常规的扩增程序即可扩增大部分的高GC含量片段，如果有需要，可以尝试在10-20μL的范围内调整5×Enhancer。
注意事项
1、本产品仅作科研用途！