价格:460
货号快速内切酶DpnII
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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快速内切酶DpnII |
HRF0421 |
50 rxns |
产品描述
本公司生产的快速内切酶DpnII是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。
color reaction buffer 包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。color reaction buffer 的红色染料与 2500 bp 双链DNA片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10bp 双链DNA片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
应用方向
1.1× reaction Buffer缓冲液，37℃温育。
2.参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
产品组分
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组分 |
规格 |
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DpnII |
50 μl |
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10×reaction buffer |
1 ml |
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10×color reaction buffer |
1 ml |
失活条件
80℃温育 20 min。
质量控制
功能活性检测:
37℃下，在 20 μl 通用 reaction buffer 反应体系中，1 μl DpnII 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA(Dam- )。
超长时间温育检测:
37℃下，在 20 μl 通用 reaction buffer反应体系中，将 1 μl DpnII 与 1 μg λDNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或 星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测:
37℃下，使用 10 倍酶量的 DpnII 消化 DNA 底物， 回收酶切产物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将 超过95% 的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开约 95% 以上的连接产物。
使用方法
- DNA快速酶切流程
① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
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组分 |
质粒 DNA |
PCR 产物 |
基因组 DNA |
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ddH2O |
15 μl |
16 μl |
30 μl |
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10× reaction buffer或 10× color reaction buffer |
2 μl |
3 μla |
5 μl |
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底物 DNA |
2 μl (up to 1 μg) |
10 μl (~0.2 μg) |
10 μl (5 μg) |
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DpnII |
1 μl |
1 μl |
5 μl |
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Total |
20 μl |
30 μl |
50 μl |
a.本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10× reaction buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有 外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。
② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
③ 37℃温育 15 min（质粒），或 15~30 min（PCR 产物），或 30~60 min（基因组 DNA）
④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）；
⑤ 如果使用 color reaction buffer 进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。
- 双酶切或多酶切
① 每种快速内切酶的用量为1 μl，并根据需要适当扩大反应体系；
② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系
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DNA |
1 μg |
2 μg |
3 μg |
4 μg |
5 μg |
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DpnII |
1 μl |
2 μl |
3 μl |
4 μl |
5 μl |
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10× reaction buffer 或 10× color reaction buffer |
2 μl |
2 μl |
3 μl |
4 μl |
5 μl |
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Total |
20 μl |
20 μl |
30 μl |
40 μl |
50 μl |
注：如果总反应体系大于 20 μl，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
注意事项
1.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2.本产品仅作科研用途！
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。