• 说明书丨HRR0531-细菌基因组DNA提取试剂盒.pdf

产品信息 

产品描述

本试剂盒采用了特殊的离心吸附柱和缓冲液体系，可以从细菌（包含革兰氏阳性和革兰氏阴性菌）中快速提取基因组DNA。只要30min左右即可完成提取，操作简单，使用方便。提取出的基因组DNA不含有蛋白和其他杂质，纯度极高。

本细菌基因组DNA提取试剂盒通用性较强，应用范围较广，目前验证的部分菌有：金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、出血性大肠杆菌 O157：H7、单增李斯特、沙门氏菌、阪崎肠肝菌等。

本试剂盒可从1-5 ml细菌培养液中，提取10-40μg纯净的基因组 DNA，所得基因组 DNA 可直接用作 PCR 模板、酶切、杂交等分子生物学实验。

产品组分

产品特点

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.适应性比较广泛，可以提取包括金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、出血性大肠杆菌 O157：H7、单增李斯特、沙门氏菌、阪崎肠肝菌等各类细菌。

4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值高达 1.7～1.9，长度可达30kb-50kb，

可直接用于PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。

运输和保存方法

1、本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2、试剂盒储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机。

2、需要自备异丙醇、0.5M EDTA 和 Lysozyme（溶菌酶） (用于革兰氏阳性菌)、 lysostaphin(用于某些难裂解的革兰氏阳性菌)。

3、开始实验前根据需要将水浴预热到 37℃或者 70℃备用

4、Buffer BB和Buffer IR中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、洗脱液Elution buffer不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。。

6、本产品仅作科研用途！

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer IR，Buffer WB中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

1、取1-2mL培养菌液（最多不超过2×10⁹个细胞），10,000rpm，离心30s，尽可能吸弃上清，收集菌体。（起始处理量可以根据细菌密度、细胞种类、预期产量进行调整 ，但是离心吸附柱最大吸附能力是40μg 基因组DNA，如果菌体过量超过最大吸附能力 ，反而会严重降低产量）

2、用200μL的PBS重悬菌体，加入20μL的溶菌酶，37℃孵育15min。

3、加入200μL buffer BB缓冲液和20μL蛋白酶K（20mg/mL），迅速混匀，70℃孵育10min

4、冷却后加入100μL的异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。（上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀）

5、组装好吸附柱和收集管，将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入到吸附柱中，12,000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。

6、加入500μL Buffer IR，12,000rpm离心30秒，弃废液。

7、加入500μL的Buffe WB（请先检查是否已经添加了无水乙醇），12,000rpm离心1min，弃废液。

8、加入600μL Buffer WB，12,000rpm离心1min，弃废液。

9、将吸附柱放回空收集管中，12,000rpm离心2min，尽量去除漂洗液，以免漂洗液残留影响下游反应

10、取出吸附柱，放入一个全新的离心管，组装好，在吸附膜的中间部位加入100μL洗脱缓冲液Elution buffer（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好），室温放置3-5分钟，12,000rpm离心1min。将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，即可获得DNA样品。

注意：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于30 μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

11、DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放在-20℃。