价格:1,200
货号HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG热启动探针法定量PCR Mix （含抗体修饰热启动酶+hUDG）
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG热启动探针法定量PCR Mix（含抗体修饰热启动酶+hUDG） |
HRF0071 |
100T |
产品描述
HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG 是一款适用于DNA模板(如DNA病毒)的探针法qPCR DNA 聚合酶，以其卓越的定量性被广泛应用，并能有效的防止污染，核心组分Taq HS DNA Polymerase是基于抗体法修饰，经过升级改造提升模板亲和能力的新一代热启动DNA聚合酶。
产品组分
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Mix 组分 |
(100T) |
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5×qPCR Buffer |
1000 μL |
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Probe qPCR Mix hUDG |
120 μL |
a、内含dUTP 及含镁离子 buffer.
b、内含 AB-HS Taq DNA polymerase
运输与保存方法
-20 ℃,保质期1年。
产品特点
1、qPCR反应；
2、高特异性和高灵敏度。
体系配制（以50μL反应体系为例）
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组分 |
体积 |
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5×qPCR Buffer |
10 μL |
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上游引物（20μM） |
0.5μL(variable) |
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下游引物（20μM） |
0.5μL(variable) |
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探针（20μM） |
0.25μL(variable) |
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DNA 模板 |
30 μL(variable) |
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Probe AB-HS qPCR Mix |
1.2 μL |
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volume |
to 50 μL |
注： 1、引物一般在 0.1μM-1μM 之间进行调整，一般情况下引物浓度在 0.2μM可达到理想的检测效果；
2、探针浓度一般在 50nM-250nM 质检进行调整；
3、扩增片段的长度一般在 80bp-150bp 之间。
反应条件
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步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
检测荧光 |
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25℃ |
5min |
1 |
Off |
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预变性 |
95℃ |
3min |
1 |
Off |
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变性 |
95℃ |
15s |
45 |
Off |
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退火 |
60℃ |
30s |
On |
注：1、预变性时间设置：由于本试剂用到的是抗体修饰酶，需要热激活处理，一般建议预变性时间设为 95℃，3min。
- 退火温度和时间设置：请根据引物的 Tm 值和目的基因的长度进行调整。
结果分析
1.扩增结束无扩增曲线
1）建议加入高浓度和高质量的 DNA 模板确保反转的成功；
2）引物是否降解，可以通过PAGE 胶确定其完整性；
3）反应循环数不够，一般将循环数设为 40-45 个循环；
4）确认PCR 程序设置中是否设置了荧光采集过程。
2.CT 值出现过晚
1）反应条件不够优化，可适当降低退火温度；
2）模板浓度过低或加样量不足；
3）PCR 产物过长，一般PCR 产物推荐长度为 80-150bp。
3.阴性对照有明显扩增
1）Mix 液、ddH2O、引物和探针可能存在污染，更换新的重新进行实验。
注意事项
本产品仅供科研用途！