• 说明书丨Minute RNA Isolation Kit微量RNA提取试剂盒.pdf

产品信息

产品描述

      本试剂盒专门用于微量样品的RNA提取。常规的微量样品如：微量的动物细胞、微切割组织和易裂解动物组织等都适用。处理范围：细胞（<10⁶）或者组织（< 5mg）。采用DNA清除/RNA吸附通用柱技术，不需要DNA酶，即可有效清除gDNA残留，得到的RNA无DNA残留，可直接用于下游反转录荧光定量PCR或者高通量测序建库等试验。

产品组分

产品特点

1.不使用苯酚，氯仿等试剂。

2.简捷，单个样品操作一般可在10分钟内完成。

3.OD260/OD280典型的比值达1.9～2.2，无DNA残留，可用于RT-PCR、Northern-blot、二代测序和各种实验。

注意事项

1.实验全过程可在常温下进行。

2.样品处理量不要超过DNA清除柱处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。如细胞处理量不超过10⁶，组织不超过5 mg。

3.裂解液RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4.本产品仅作科研用途！

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量无水乙醇!

→如果处理的细胞量小于 5000 个或者处理组织量小于 10 μg 时，匀浆前请在裂解液中加入 4 μl Poly Carrier。

1. 培养细胞
A1. 贴壁细胞：不需消化，彻底吸干净培养液体后直接加 350 μL裂解液 RLT Plus反复吹打细胞裂解，将裂解混合物全部加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱上（通用柱放在收集管内）直接接操作步骤 3；

不方便直接裂解的培养容器，可以用细胞刮子刮下细胞，或者胰蛋白酶消化后吹打下来收集细胞到 1.5mL 离心管。

A2. 悬浮细胞：收集< 10⁶ 悬浮细胞到一个1.5 mL离心管。

B. 13，000 rpm 离心 10 秒（或者 300g 离心 5 分钟），使细胞沉淀下来。完全吸弃上清，留下细胞团，注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。

C. 轻弹离心管底部，使细胞沉淀松散，加 350 μL 裂解液 RLT Plus，用移液器反复吹打充分裂解 (直到看不细胞团为止 )。

D. 将全部裂解混合物加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱上（通用柱放在收集管内）。

E. 立刻接操作步骤 3。

2. 动物组织（例如鼠肝脑）

A1. 电动匀浆：<5 mg 组织加入 350 μL 裂解液 RLT Plus 后电动彻底匀浆 20-40 秒。

A2. 研磨杵+匀浆：1.5 mL 离心管内，加入 100 μL 裂解液 RLT Plus ，加入< 5mg组织立刻用微量研磨杵研磨匀浆完全。补足裂解液 RLT Plus 到 350μL。

A3. 液氮研磨+匀浆：在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉(<5 mg )转入装有 350 μL 裂解液 RLT Plus 的 1.5 mL 离心管中，涡旋振荡 20 秒，充分裂解。难裂解样品可用移液器反复吹打匀浆或者研磨杵帮助匀浆。

B. 将全部匀浆混合物加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱上（通用柱放在收集管内）。

C. 立刻接操作步骤 3。

3. 立刻 13,000 rpm 离心 1 分钟，保留滤过液（RNA 在滤过液中）。

4. 用微量移液器较精确估计滤过液体积（通常为 350 μL），加入等体积的 70%乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇!），此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

5. 立刻将混合物加入一个新的 DNA 清除/RNA 吸附通用柱中，（通用柱放入收集管中）13,000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。

6. 加 700 μL 去蛋白液 RW1，室温放置 30 秒，13，000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。

7. 加入 500 μL 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm 离心 30秒，弃掉废液。加入 500 μL 漂洗液 RW，重复一遍。

8. 将 DNA 清除/RNA 吸附通用柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

9. 取出通用柱，放入一个干净 1.5mL 离心管中，根据预期 RNA 产量在吸附膜的中间部位加 15-25 μL RNase free water（事先在 80-100℃水浴中加热可提高产量）， 室温放置 1 分钟，13,000rpm 离心 1 分钟得到 RNA 溶液。
减少洗脱体积可以提高 RNA 浓度，但是 RNA 产量会降低，用户根据需要选择。

运输和保存方法

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。