• 说明书丨HRQ0272-动物组织 细胞RNA快速提取试剂盒.pdf
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产品信息 

产品描述

      本试剂盒适用于动物组织、细胞样本的总 RNA 提取，仅需约 25 分钟即可完成实验，操作简单易用。产品集合 TRIzol 法与柱式法双重优势，实验无需氯仿或氯仿替代物，大幅降低 RNA 提取的法规和技术限制。提取获得的总 RNA 纯度高，无蛋白等杂质污染，能够满足 RT‑PCR、Real Time RT‑PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、Poly A 筛选、体外翻译、分子克隆等多种下游实验需求。

      本动物组织/细胞RNA快速提取试剂盒通用型强，兼容性好，可广泛使用于各类组织/细胞样本的提取。目前已验证可用于提取NIH/3T3细胞、HeLa细胞、COS-7细胞、LMH细胞、Huh细胞、鼠或大鼠的胚胎、肾、肝、脾、肺、胸腺等各类细胞或组织样本。

产品组分

产品特点

1.不使用氯仿等试剂。

2.简捷，单个样品操作一般可在25分钟内完成。

3.适应性比较广泛，可以提取包括NIH/3T3细胞、HeLa细胞、COS-7细胞、LMH细胞、Huh细胞、鼠或大鼠的胚胎、肾、肝、脾、肺、胸腺等各类细胞或组织样本。

4.多次柱漂洗确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀ 典型的比值高达 2.1～2.2，基本无 DNA 残留，可用于RT-PCR，Northern-blot 和各种实验。

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在  Buffer  RPE 中添加指定量的无水乙醇 ，并做好标记！

1.匀浆处理

a.贴壁培养细胞

①倒弃培养液，用1×PBS洗涤一次。

②对六孔板生长的培养细胞中加入500μL的TRIpure Reagent，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，静置片刻，用移液器吹打细胞使其脱落，亦可用细胞刮刀剥离细胞（对于10cm²面积的培养皿加入2mL的TRIpure Reagent）。

③细胞裂解物转移至离心管中，加入200μL的Elution buffer，上下颠倒混匀。

④室温涡旋振荡5分钟。

b.悬浮细胞

①将菌液或悬浮细胞倒入离心管中，8,000×g 离心2分钟，弃上清。

②加入TRIpure Reagent（每5×10⁶个细胞中加入500μL的TRIpure Reagent），用移液枪反复吸打约 10 次让细胞充分裂解。

③加入200μL的Elution buffer，上下颠倒混匀。

④室温涡旋振荡5分钟。

c.动物

①取10-50mg动物组织到离心管中，加入 500μL的TRIpure Reagent，迅速用研磨杵或匀浆器进行充分匀浆。肝脏、脾脏、肾脏等组织样品富含 RNA 和蛋白质，建议把样品量控制在 10-25mg。

②加入200μL的Elution buffer，上下颠倒混匀。

③室温涡旋振荡5分钟。

2.在2-8℃下，10,000×g离心10min。RNA被保留在水相中。

3.转移无色的水相上清液到新的1.5mL离心管中，加入等体积异丙醇，轻轻颠倒混匀（上层水相约600μL，吸取500μL即可，注意避免吸到杂质）。

4.将上述获得的溶液加入离心柱中，4℃，12,000×g离心30s，倒弃流出液（如果溶液体积大于离心柱容量，可以分几次完成）。

5.加入500μL的Buffer RPE（使用前请先检查是否已加入无水乙醇!），4℃，12,000×g离心1min，弃废液。

6.重复步骤5一次。

7.12,000×g离心1min，以彻底去除残留的乙醇。

8.将离心柱放入RNase-free Tube中，加入20-50μL的无酶水在离心柱中央，室温静止2min，12,000×g离心1min，洗脱RNA，RNA即在离心管中。

9.将RNA放在-80℃长期保存。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积最好不少于20μl，体积过小降低RNA洗脱效率，减少RNA产量。

运输和保存方法

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

注意事项

1、实验过程使用的离心机均可在4℃进行，转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机

2、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA残留或者RNA产量降低

3、TRIpure Reagent中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4、样品处理量不要超过吸附柱处理能力，否则造成 DNA 残留或者产量降低。不同组织细胞种类 RNA/DNA 相差较大，例如胸腺脾脏 DNA 含量丰富，超过 5mg就会超过柱子处理能力。COS 细胞 RNA 含量丰富，超过 3x10⁶ 细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品 DNA/RNA 含量时宁可使用较少的样品处理量，如细胞不超过 3-4×10⁶，组织不超过10mg。后续根据样品试验情况增加或者减少处理量。

5、RNA纯度及浓度检测：

完整性：RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳 (电泳条件：胶浓度 1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150v，15分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA，电泳后UV下应能看到非常明显的rRNA条带。动物rRNA大小分别约为5 kb和2kb，分别相当于28S和18S rRNA。动物RNA样品中最大rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0倍，否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。

纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品，假定在10mM Tris，pH7.5溶液中测出的 OD260/OD280 读数1.8-2.1之间，

在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。

浓度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-free水稀释n倍，用RNase-free水将分光光度计

调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μL）= (OD260)×(稀释倍数n)×40。

8、本产品仅作科研用途！