价格:3,200
货号PAXgene Blood miRNA Kit(For PAXgene blood tube) miRNA提取试剂盒（适用于PAXgene采血管）
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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PAXgene Blood miRNA Kit(For PAXgene blood tube) miRNA提取试剂盒（适用于PAXgene采血管） |
HRN0383 |
50 T |
产品描述
PAXgene Blood miRNA提取试剂盒专用于PAXgene采血管中分离和纯化大于18nt的总RNA（含miRNA），提取的过程去除了各种污染和其他抑制物，能够有效提取高质量的RNA，提取出的RNA可用于下游的RT-PCR等应用。
血液样品通过离心从PAXgene管中取出，样品经过特殊的缓冲液洗涤和裂解，离心去除细胞碎片和其他颗粒物后，向样品中加入异丙醇，混合物加入RNA结合柱，样品流过RNA结合柱，基因组DNA经柱上消化后，三次洗涤，获得高纯度的RNA/miRNA。
产品组分
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试剂盒组成 |
保存 |
50 T |
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RP Buffer |
室温 |
20 mL |
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BB Buffer |
室温 |
50 mL |
| WS1 Buffer | 室温 | 12 mL（使用前加入适量无水乙醇） |
| WS2/3 Buffer |
室温 |
10 mL（使用前加入适量无水乙醇） |
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RNase-free H20 |
室温 |
10 mL |
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DNase Buffer |
-20℃ |
1.5mL×2 |
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RNase free DNase I |
-20℃ |
250μL |
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Proteinase K(20mg/ml) |
-20℃ |
20mg |
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RNA Binding Columns |
室温 |
50套 |
需要自备的材料
1.离心机转速能达到13,000×g。
2.异丙醇。
3.无酶的移液枪头和无酶水。
4.1.5mL无酶离心管。
运输和保存方法
1）本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
2）避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
使用方法
提示：
→第一次使用前请先在WS1 Buffer 瓶和 WS2/3 Buffer中加入指定量无水乙醇!
1.将PAXgene RNA采血管放置在水平转子离心机中离心10分钟，转速3,000-5,000×g。
2.吸出并丢弃上清液
3.加入4mL RNase-free水（自备），涡旋重悬底部颗粒沉淀物。
4.将PAXgene RNA采血管再次放置在水平转子离心机中离心10分钟，转速3,000-5,000×g。
5.吸出并丢弃上清液（请务必完全去除上清，否则可能降低裂解效率，细胞裂解不充分，导致RNA产量降低）。
6.加入350μL RP Buffer，充分涡旋重悬底部颗粒沉淀物。
7.将第6步获得的样品转移到1.5mL无酶离心管中。
8.加入300μL BB buffer和20μL Proteinase K溶液，充分涡旋5 sec。
9.在55℃振荡培养箱中孵育10min。
10.（可选步骤）为降低样品的粘稠度，可以将裂解物多次经过注射器针头，剪切基因组DNA。
11.上一步裂解产物13,000rpm ，3min，将上清转移到新的离心管中。
12.准确估算上清液的体积，并加入等体积的异丙醇，充分混匀。
13.将上述混合液加入到组装好的RNA结合柱上（一次上样不超过700μL）。
14.以最高速度离心1min。
15.去除滤液，重复使用收集管。
16.重复步骤13-15直至把所有的混合液都加入到柱子中。
17.加入350μL WS1 Buffer。
18.最大速度离心1min。
19.去除滤液，重复使用收集管。
20.每一个RNA结合柱都需要配制以下的DNase I消化液。
| Buffer | 1次使用量 | 10次使用量 |
| DNase Buffer | 45 μL | 450 μL |
| RNase-free DNase I | 5 μL | 50 μL |
| 总体积 | 50 μL | 500 μL |
由于DNase I比较敏感，请小心轻柔的混匀。
21.将50μL DNase I消化液加入到RNA结合柱中，注意小心将液体加入到柱子中膜的中间位置。
22.室温静置15min。
23.加入350μL WS1 Buffer，最大转速离心1min。
24.去除滤液，重复使用收集管。
25.加入500μL的WS2/3 Buffer，最大转速离心1min。
26.去除滤液，重复使用收集管。
27.重复步骤25-26进行第二次洗涤。
28.RNA结合柱以最大转速离心2min去除残留的乙醇（务必完全去除乙醇，否则将影响后续实验）。
29.将RNA结合柱组装到一个全新未使用的无酶离心管中。
30.向RNA结合柱的膜中间位置加入50-70μL RNase-free water（预热到70-90℃有助于提高RNA产量），室温静置1min。
31.最大转速离心2min，洗脱获得RNA。