• 说明书丨HRRD0081-分离胶缓冲液.docx

产品信息

产品描述

      本试剂由 1.5mol/L Tris-HCl (pH=8.8)和 0.4% SDS 组成，主要用于制备变性及非变性 SDS-PAGE 凝胶。配制分离胶时，10ml 制胶体系中加入 2.5ml（4 倍稀释）。

      本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断。

自备材料

1.凝胶模具 2.Acr-Bis (30%,29:1)  3.10%APS (过硫酸铵)  4. TEMED  5. 蒸馏水

使用说明

根据目的蛋白分子量大小选择合适的 PAGE 分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表 1。

（一）灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表 2）

1.参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。(注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。)

2.将不同体积的 Acr-Bis(30%,29:1)、分离胶缓冲液和蒸馏水在小烧杯或试管中混合。

3.加入 10%APS 和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于 mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm 或距梳齿约 0.5cm 即可)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层 1-2cm 水层，使凝胶表面保持平整。

5.静置 30～60min，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

(二) 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表 3)

1.小心倾倒出覆盖在分离胶上的水层。

2.将不同体积的 Acr-Bis (30%,29:1)、浓缩胶缓冲液和蒸馏水在一个小烧杯或试管中混合。

3.加入 10%APS 和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4.将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

5.将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

6.静置，等待浓缩胶聚合。

7.待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。

8.进行常规电泳操作

运输和保存方法

常温运输。常温保存，有效期12个月。

注意事项

1）过硫酸铵配制成 10%溶液后应当-20℃保存。应尽量减少室温存放时间以防失效。

2）避免失效的方法是分装后-20℃保存，用 2~3 次，剩余的弃掉，亦可 4℃保存几天。

3）TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当  调节 TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。

4）配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于 37℃放置，加速凝固。

5）Acr-Bis(30%,29:1)有轻微神经毒性，请小心操作。

6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附表 1. 不同浓度的 SDS-PAGE 分离胶的最佳分离范围

附表 2. 配制 SDS-PAGE 分离胶，配制 10ml 分离胶所需各成分的体积(毫升)

附表 3. 配制 5%SDS-PAGE 的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)