价格:400
货号2×CTAB Extraction Buffer 2×CTAB提取缓冲液
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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2×CTAB Extraction Buffer 2×CTAB提取缓冲液 |
HRN0150 |
500mL |
产品描述
CTAB（hexadecyItrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
本产品2×CTAB提取缓冲液，是经过改良后的CTAB提取液，提取的DNA浓度和纯度都更高，也更加适合多糖多酚植物DNA的提取。
应用范围
适用于各种植物基因组DNA的快速抽提
使用方法
一、试剂的准备
1.氯仿-异戊醇混合液（24:1），96mL氯仿加4mL异戊醇混匀。
2.65℃预热CTAB溶液后，加入1mL β-巯基乙醇到CTAB溶液中（按照500:1体积比混合，按需配制，现配现用。）
二、操作步骤
1、液氮研磨 0.1g 左右植物组织，转移到 1.5mL 离心管中，加入700μL 2×CTAB提取液（已加入β-巯基乙醇）。或者液氮研磨之后，在研钵中加入 700μL 2×CTAB 提取液，然后吸取到1.5mL的离心管中（建议总体积不要超过 1mL）。
2、将离心管置于 65℃水浴 30min-1h，期间每隔 10min 左右轻轻晃动离心管。
3、水浴完成后冷却2min，加入0.5mL的氯仿-异戊醇混合液，剧烈震荡混匀。10000-12000rpm离心5-10min。
4、取上步离心管中上清液到新的离心管中。注意：上步离心后应该会分三层：上层为水相，中间为蛋白和植物碎片，下层为有机相。吸取时避免触及蛋白和有机相。如不小心吸取到中下层，或者中间层较厚，建议少吸取水相，或吸取之后再加入500 μL氯仿-异戊醇混合液，重新混匀离心取上清。
5、在上清中加入等体积的异丙醇，颠倒混匀。（或加入2倍体积的无水乙醇和1/10体积的3M pH5.2的乙酸钠）。置于-20°C沉淀30min以上，12000rpm离心10min，弃上清。
6、沉淀用75%乙醇洗涤1次，12000rmp离心3-5 min，弃上清，沉淀自然干燥后溶于50μL去离子水或者TE缓冲液中，加入1μL RNase（20ug/mL），37℃温育30 min。
7、置于-20℃保存。
常见问题
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应 | DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质 | 重新纯化DNA，去除蛋白、多糖、多酚等杂质 |
| DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制后续酶解反应 | 重新沉淀DNA，让酒精充分挥发 | |
| DNA中残留有金属离子 | 增加70%乙醇洗涤的次数（2-3次） | |
| DNA降解，DNA提取量少 | 实验材料不佳或量少 | 选用新鲜（幼嫩）的材料 |
| 破壁或裂解不充分 | 植物要匀浆研磨充分；G+菌、酵母裂解前先用生物酶或机械方式破壁；高温裂解时，时间适当延长 | |
| 沉淀不完全 | 低温沉淀，延长沉淀时间；加辅助物，促进沉淀 | |
| 洗涤时DNA丢失 | 洗涤时，最好用枪头将洗涤液吸出，勿倾倒 |
运输和保存方法
常温运输。常温、避光保存，有效期2年。
注意事项
1.本产品低温放置易析出，需50℃预热震荡30min左右可正常溶解使用。
2.请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3.本产品仅作科研用途！