• 说明书丨HRQ0521-全血+组织+细胞基因组DNA快速提取试剂盒.pdf

产品信息

产品描述

本试剂盒采用了特殊的离心吸附柱和缓冲液体系，可以从全血/组织/细胞中快速提取基因组DNA。操作简单，使用方便。提取出的基因组DNA不含有蛋白和其他杂质，纯度极高。

本全血/组织/细胞DNA快速提取试剂盒通用型强，兼容性好，可广泛使用于各类全血/组织/细胞样本的提取。目前已验证可用于提取DNA的动物有人、大鼠、小鼠、兔、牛、马、猪、羊、狗、猫、鸡等的组织、细胞和全血。

产品组分

运输和保存方法

1）本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2）试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品特点

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂。

2.简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.适应性比较广泛，可以提取人、大鼠、小鼠、兔、牛、马、猪、羊、狗、猫、鸡等的组织、细胞和全血的基因组DNA。

4.多次柱漂洗确保高纯度，典型的产量200µl全血可提取出3-6µg，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应。

使用前必读

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机。

2、需要自备乙醇、1×PBS、RNase A（100mg/mL）和溶菌酶（革兰氏阳性菌使用）等。

3、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA产量降低

4、ATL、AL和AW1中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。

6、开始实验前将需要的水浴先预热到 56℃备用。

7、为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于 3 天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。。

8、产品仅用于科研等非医疗用途

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer AW1，Buffer AW2中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

一、全血

1、取200μL新鲜、冷冻或加入抗凝剂的血液，放入1.5mL离心管。

   注：若全血起始量小余200μL，则需用PBS补足到200μL。若起始量超过300μL，则需要先进行红细胞裂解操作（见本说明书后附录）

   若处理血液样本为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核

细胞，因此处理量仅用5-20μL，可加1×PBS补足到200μL后进行后续步骤。

2、加入20μL的Proteinase K到上述离心管中，充分混匀，再加入200μL 的Buffer AL，立刻涡旋振荡充分混匀，在56℃孵育10min。如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在加入Buffer AL之前加5μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。

3、加入200μL无水乙醇到样品中，涡旋振荡充分混匀。

4、将上述混合液加入到组装好的（离心柱放入收集管中）离心柱中，12,000rpm离心1min，弃废液。

5、加入500μL的Buffer AW1，12,000rpm离心30s，弃废液。

6、加入500μL的Buffer AW2，12,000rpm离心30s，弃废液。

7、重复一遍步骤6.

8、将离心柱放回空的收集管中，12,000rpm离心2min，尽量去除残留液体，以免影响下游反应。

9、将离心柱放入一个新的1.5mL离心管中，向离心柱膜的中央加入100-200μL Buffer AE（Buffer AE可事先在80℃下预热，以提高DNA产量），室温放置3min，12,000rpm离心1min。洗脱体积越大、洗脱效率越高，本试剂盒最小洗脱体积不应该低于50μL。

10、可将步骤9中洗脱所得的溶液重新加入离心柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，可以提高DNA的浓度。（该步骤为可选步骤）

二、培养细胞

1、收集约105-106悬浮细胞到1.5 m离心管；对于贴壁细胞，应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。

2、12, 000 rpm 离心 10 sec，使细胞沉淀下来。吸弃上清，留下细胞团。

3、加入200μL PBS重悬洗涤细胞，12, 000 rpm 离心 10 sec，使细胞沉淀下来。完全吸弃上清，将细胞沉淀重悬于180μL的PBS中。

4、加入20μL的Proteinase K到上述离心管中，充分混匀，再加入200μL 的Buffer AL，立刻涡旋振荡充分混匀，在56℃孵育10min。如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在加入Buffer AL之前加5μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。

5、加入200μL无水乙醇到样品中，涡旋振荡充分混匀。

6、将上述混合液加入到组装好的（离心柱放入收集管中）离心柱中，12,000rpm离心1min，弃废液。

7、加入500μL的Buffer AW1，12,000rpm离心30s，弃废液。

8、加入500μL的Buffer AW2，12,000rpm离心30s，弃废液。

9、重复一遍步骤6.

10、将离心柱放回空的收集管中，12,000rpm离心2min，尽量去除残留液体，以免影响下游反应。

11、将离心柱放入一个新的1.5mL离心管中，向离心柱膜的中央加入100-200μL Buffer AE（Buffer AE可事先在80℃下预热，以提高DNA产量），室温放置3min，12,000rpm离心1min。洗脱体积越大、洗脱效率越高，本试剂盒最小洗脱体积不应该低于50μL。

12、可将步骤9中洗脱所得的溶液重新加入离心柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，可以提高DNA的浓度。（该步骤为可选步骤）

三、动物组织

1、将20-50mg组织用解刨到切成小碎块或在液氮中研磨成细粉，转入到装有180μL Buffer ATL的1.5mL离心管中。

2、加入20μL的Proteinase K到上述离心管中，立刻涡旋振荡充分混匀，在56℃孵育水浴1-3小时或者直到组织消化完全为止，期间轻柔的振荡几次，帮助裂解。如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在组织裂解完成后加5μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。

3、涡旋15s后，加入200μL的Buffer AL到样品中，立刻涡旋振荡充分混匀。

4、加入200μL无水乙醇到样品中，涡旋振荡充分混匀。

5、将上述混合液加入到组装好的（离心柱放入收集管中）离心柱中，12,000rpm离心1min，弃废液。

6、加入500μL的Buffer AW1，12,000rpm离心30s，弃废液。

7、加入500μL的Buffer AW2，12,000rpm离心30s，弃废液。

8、重复一遍步骤6.

9、将离心柱放回空的收集管中，12,000rpm离心2min，尽量去除残留液体，以免影响下游反应。

10、将离心柱放入一个新的1.5mL离心管中，向离心柱膜的中央加入100-200μL Buffer AE（Buffer AE可事先在80℃下预热，以提高DNA产量），室温放置3min，12,000rpm离心1min。洗脱体积越大、洗脱效率越高，本试剂盒最小洗脱体积不应该低于50μL。

11、可将步骤9中洗脱所得的溶液重新加入离心柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，可以提高DNA的浓度。（该步骤为可选步骤）

红细胞裂解操作

附录（以500μL为例）

1、向1.5mL无菌的离心管中加入 1mL RBC 溶液（RBC可向本公司购买，货号：HRA2081）。

2、加入500μL全血，上下颠倒混匀（请勿使用涡旋仪）

3、在水平摇床或者旋转摇床上摇动 10min（环境温度尽量控制在 15℃-25℃之间）；或者手动上下翻转离心管 10min。

4、将离心管放置离心机中，以 2500rpm （500×g）转速离心 5min。

5、用移液器小心吸取上清液并丢弃。

6、加入 1mL RBC 溶液到离心管的白色颗粒中，通过“弹管”混匀，直到颗粒被重悬（不要使用涡旋仪）。

7、将离心管放置离心机中，以 2500rpm（500×g）转速离心 3min。

8、小心吸取并丢弃上清液，特别是在白色颗粒外表面形成的红色血细胞碎片环。

9、用 200μL PBS 重悬白色颗粒，充分分散白细胞团。

10、现在可以按照说明书提取全血基因组DNA了。