• 说明书丨HRF0415-Avrll.pdf

产品信息

产品描述

本公司生产的AvrII酶是通过基因重组表达获得的快速限制性内切酶，适用于质粒  DNA、PCR产物或基因组  DNA 等的快速酶切。

Color Reaction Buffer  包 括红 色和 黄 色示 踪染 料 ， 可 将产 物直 接 用于 凝胶 电 泳 。 Color Reaction Buffer  的红色染料与  2500 bp 双链  DNA  片段在  1%  琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与  10 bp 双链  DNA  片段在  1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

酶切位点

同裂酶：AspA2I, BlnI, XmaJI

注意事项

1）可在5~15 min 内完成反应；

2）最适反应温度为37℃；

3）对于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻

4）失活条件为80℃温浴20min

5）3h温浴未表现星号活性，更长时间酶切可能出现星号活性

6)本产品仅作科研用途！

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。

产品组成

使用方法

1. DNA快速酶切过程

1）在冰上配制以下反应体系：

a . 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10× Reaction buffer加入量可适当减少至 2  μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。

2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋） ，然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

3） 37℃温育 15 min（质粒） ，或 15~30 min（PCR 产物），或 30~60 min （基因组 DNA）；

4） 酚氯仿抽提或柱纯化（可选）；

5）如果使用  10×Color Reaction buffer 进行酶切反应 ，得到的产物可以直接进行上样电泳。

2. 双酶切或多酶切

• 每种快速内切酶的用量为1μl，并根据需要适当扩大反应体系；
• 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
• 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3. 适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于 20 μl，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。