• 说明书丨HRD0429-Oil Red O Staining Solution 油红O染色液.pdf

产品信息:

产品描述：

      Oil Red O Staining Solution 油红 O 染色液是细胞生物学与干细胞研究中特异性标记中性脂质的经典染色试剂，也是鉴定间充质干细胞成脂分化效果的金标准检测试剂。它能够特异性结合细胞内的脂滴并显色，直观呈现脂质沉积情况，操作简便、显色清晰，广泛用于成脂分化评价、脂代谢研究与病理脂质检测。

使用方法（以ox-LDL诱导RAW264.7细胞泡沫化，油红O染色为例）：

一、细胞接种：

①、取对数生长期的 RAW264.7 细胞，用 PBS 洗涤 1 次，0.25% 胰蛋白酶-EDTA 消化 2-3min，加入含血清培养基终止消化。

②、1000r/min 离心 5min 收集细胞，用培养基重悬并计数，调整细胞浓度至 1×10⁵个 /mL。

③、按实验需求接种至不同培养板：

96 孔板（用于细胞活力检测CCK-8）：每孔 100μL 细胞悬液，每组 3 个复孔（选做）。

12 孔板（用于油红 O 染色）：每孔 1mL 细胞悬液。

置于 CO₂培养箱中培养 24h，使细胞完全贴壁。

二、ox-LDL 诱导处理：

吸弃各孔旧培养基，分别加入含200μg/mL ox-LDL的新鲜培养基，空白对照组加入等量无菌 PBS。继续置于CO₂培养箱中孵育，诱导时间48h。

三、检测指标和方法

①、CCK-8检测细胞活力：每孔加入10μL CCK-8，置于CO₂培养箱中反应30min，于酶标仪检测OD值。

②、巨噬细胞泡沫化鉴定（油红O染色法）：

1).12 孔板诱导 48h 后，吸弃培养基，用 PBS 洗涤 2 次，加入 4% 多聚甲醛 （货号：HRA2070）固定 30min。

2).弃固定液，PBS 洗涤后，加入油红 O 染色液（油红 O 储存液：蒸馏水 = 3:2，过滤后使用），室温避光染色 30min。

3).用 60% 异丙醇洗涤 2 次，去除多余染液，再用 PBS 洗涤 1 次，加入少量 PBS 浸没细胞。

4).倒置显微镜下观察并拍照，泡沫细胞因吞噬脂质呈红色颗粒状；用 ImageJ 软件统计红色阳性细胞率。

实验结果（实例）：

实验数据：

1、CCK8活力检测：

2、油红O染色检测细胞阳性率

实验图片：

Sample 01

100x

200x

400x

Sample 02

100x

200x

400x

保存条件：

4℃避光保存，12 个月有效。

注意事项：

1、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅作科研用途！