• 说明书丨HRD2201-Ni-NTA Agarose Magbeads Ni-NTA琼脂糖磁珠.pdf
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产品信息

产品描述

      本产品Ni-NTA Agarose MagBeads是基于超顺磁性琼脂糖微球为载体，表面共价偶联NTA（次氮基三乙酸）螯合基团并负载镍离子的金属螯合亲和磁珠（IMAC）。本产品采用高纯度交联琼脂糖基质，搭配稳定的四齿螯合NTA结构，可特异性结合带有6×His、8×His标签的重组蛋白。

      产品兼容天然活性纯化（非变性）与变性纯化（含尿素/盐酸胍）两种实验体系，具备镍离子脱落率低、载量高、非特异性吸附低、磁分离速度快等优势，广泛适用于科研级重组蛋白快速纯化、高通量样本筛选、Pull-down互作实验等场景。 

产品优势

1、高结合载量：优化NTA螯合工艺，蛋白结合容量高，单次纯化可获得高产量目的蛋白；
2、螯合稳定性强：四齿配位结构牢牢固定镍离子，耐受常规洗涤、低浓度还原剂，镍脱落极低，减少蛋白污染；
3、双体系兼容：同时适配非变性温和条件与高浓度尿素/盐酸胍变性体系，适用范围广；
4、极低非特异吸附：亲水性琼脂糖基质，有效减少杂蛋白非特异性结合，纯化产物纯度高；
5、超顺磁特性：无剩磁、不团聚，磁响应速度快，30s内完成快速磁分离，操作便捷；
6、可重复再生：支持多次脱镍、重镍活化再生，大幅降低实验成本；
7、适配高通量：兼容离心管手动纯化、磁力板高通量筛选、自动化磁珠纯化设备。

产品信息

适用范围

1、6×His/8×His标签重组蛋白纯化（原核、真核表达体系）；
2、天然态活性蛋白纯化、变性态包涵体蛋白纯化；
3、蛋白Pull-down实验、蛋白互作验证；
4、 高通量蛋白样本筛选与富集；
5、酶蛋白、功能重组蛋白批量制备。

使用方法

使用前请配制好相应的缓冲液：

结合缓冲液Lysis buffer：20 mM Tris、500 mM NaCl、10–20 mM 咪唑，pH 7.4–8.0；
洗涤缓冲液Wash buffer：20 mM Tris、500 mM NaCl、40–60 mM 咪唑，pH 7.4–8.0；
洗脱缓冲液Elution buffer：20 mM Tris、500 mM NaCl、250–500 mM 咪唑，pH 7.4–8.0；
变性体系缓冲液De buffer：添加8M尿素或6M盐酸胍，适配对应结合、洗涤、洗脱配方。

一、磁珠预处理
1、产品2–8℃取出，室温平衡10–15 min，充分颠倒混匀，使磁珠完全分散；
2、吸取所需体积磁珠悬液至离心管，置于磁力架静置30 s，完全吸附后彻底弃除上清；
3、加入等体积结合缓冲液轻柔重悬洗涤，磁力分离弃上清，重复洗涤2次，完成平衡。

二、样品结合
1、将预处理后的蛋白样品（裂解上清/变性溶解液）与平衡好的磁珠充分混合；
2、室温翻转孵育30–60 min（低丰度蛋白可4℃孵育1–2 h），保证充分结合；
3、磁力分离30 s，收集流出液，可用于检测结合效率。

三、杂蛋白洗涤
1、加入适量洗涤缓冲液轻柔吹打重悬磁珠，室温静置5 min；
2、磁力分离弃上清，重复洗涤3–5次，彻底去除非特异性结合杂蛋白；
3、最后一次洗涤尽量吸干残留上清，避免稀释洗脱液。

四、目的蛋白洗脱
1、加入适量洗脱缓冲液，轻柔重悬磁珠，室温孵育5–10 min；
2、磁力分离后小心收集上清，即为纯化His标签蛋白；
3、为提升回收率，可重复洗脱1次，合并两次洗脱液。

五、磁珠再生与保存（可重复使用）
1、洗脱后的磁珠用超纯水洗涤2次，去除残留咪唑；
2、使用50 mM EDTA溶液孵育10 min，彻底脱除残留镍离子，洗涤干净；
3、0.1 M NiSO₄溶液重悬孵育20 min，重新螯合镍离子；
4、纯水洗涤多余镍离子，最后用20%乙醇重悬，2–8℃保存备用。

运输与保存方法

切勿冷冻！冰袋运输，4℃储存，有效期1年。

注意事项

1) 严禁冷冻磁珠，冷冻会破坏琼脂糖微球结构，导致磁珠失效、载量下降

2) 全程避免剧烈震荡、高强度吹打，防止磁珠破碎，增加非特异性吸附

3）样本中避免高浓度EDTA、EGTA等螯合剂，会竞争脱去磁珠镍离子，降低结合效率

4) 还原剂浓度不可过高，高浓度DTT会导致镍离子脱落，建议控制在5 mM以内

5) 咪唑浓度需梯度优化，洗涤咪唑过低杂蛋白多，过高会造成目的蛋白提前洗脱

6）本产品仅作科研用途，非临床治疗使用！