价格:460
货号Exonuclease III核酸外切酶 III
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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Exonuclease III核酸外切酶 III |
HRF0453 |
5000 U |
产品描述
本产品Exonuclease III是一种核酸外切酶，该酶作用于双链DNA，从3'-OH末端方向逐步切去单核苷酸。
该酶最适底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于双链DNA切刻位点产生单链缺口。由于对单链DNA无活性，因此该酶难以切割3'突出末端。3'到5'外切酶活性对底物的消化程度随3'突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端难以被切割。这种特性可以用于生产特定方向的单链DNA，将线性化DNA设计成为一端为不切割末端（3'突出端），另一端则设计为易切割末端（平端或5'突出端），此时Exonuclease III将仅消化一条链。
Exonuclease III也有RNase H、3'-磷酸酶和脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性。
应用方向
1. 单向嵌套缺失
2. 定点突变
3. 单链特异性探针的制备
4. 双脱氧测序用单链底物的制备
产品组成
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组分 |
规格 |
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Exonuclease III (100 U/μl) |
50 μl |
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10× Exo III Buffer |
500 μl |
反应条件和酶活定义
1× Exo III Buffer，37℃孵育。
酶活定义：一个酶活单位 (U) 的定义是以双链 DNA 为底物在 37℃下孵育 30 min，生成 1 nmol 的酸可溶性物所需的酶量。
使用方法
1、在冰上配制如下反应体系：
| 试剂 | 使用量 |
| DNA | ~5 μg |
| 10× Exo III Buffer | 5 μl (1×) |
| Exonuclease III (100 U/μl) | 0.5 μl |
| Nuclease-Free Water | To 50 μl |
2、37℃孵育 30 min；
3、加入终浓度为 11 mM 的 EDTA 以停止反应；
4、热失活条件为 70℃孵育 30 min；
5、 建议采用以下步骤回收处理后的样本：
a.使用 PCR 柱清洁；
b. 进行琼脂糖凝胶电泳，然后胶回收 DNA；
c. 进行苯酚 / 氯仿萃取，后使用乙醇沉淀;
注意事项
1.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2.本产品仅作科研用途！
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。