• 说明书-TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽.pdf

产品信息

背景描述

鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏的环状七肽毒素，以高亲和力选择性结合于丝状肌动蛋白 F-actin，而不会与单体肌动蛋白 G-actin 结合，通常用来标记组织切片、细胞或无细胞体系中的F-actin，从而对 F-actin 进行定性和定量分析。本产品为 TRITC 标记的鬼笔环肽，染色反应特异性强，对比性高，具有比 Actin 抗体更好的染色效果。

本产品以溶于甲醇 20uM 储存液形式提供，推荐工作浓度为 80~200 nM。本产品总体积 300uL，按照100nM 的工作液浓度换算，可以制备总量 60mL 染色工作液，单次用量为 200 μL 染色工作液时，可以用于 300 个样品的检测。

使用方法（仅供参考）

1．工作液的配置：使用 1×PBS 缓冲液（含 1%BSA）稀释储存液到需要的工作浓度即可。

2．细胞爬片生长>24h，使其密度达到 50~60%汇合度。

3．吸掉培养液，37℃预热的 1×PBS 清洗 2 次。

4．使用 4%多聚甲醛溶液进行细胞固定，室温固定 10~30min。

注：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

5．室温条件下，用 PBS 清洗细胞 2~3 次，每次 10min。

6．室温条件下，用丙酮（≤-20℃）脱水或者用 0.5% Triton X-100 溶液透化处理 5min。

7．室温条件下，用 PBS 清洗细胞 2~3 次，每次 10min。

8．取 200 µL 配制好的 TRITC 标记鬼笔环肽工作液，覆盖住爬片上的细胞，室温避光孵育 30 min。

9．用 PBS 清洗细胞 3 次，每次 5min。

10．使用 DAPI 溶液对细胞核进行复染，约 30s。PBS 清洗细胞。

11．使用抗荧光淬灭封片剂进行封片。4℃避光保存，通常 6 个月内可继续做 F-actin 染色分析。

注：也可以直接使用含有 DAPI 的抗荧光淬灭封片剂合并步骤 10 和 11。

12．荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择 TRITC 激发/发射滤片（Ex/Em=545/570 nm）

和 DAPI 激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃避光干燥保存， 1年有效。

注意事项

1、建议对本产品分装并于-20℃避光保存，避免反复冻融。

2、不同的细胞染色情况不同，相应标记鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

3、鬼笔环肽具有毒性，需小心操作。

4、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。