• 说明书丨HRQ0401-Polysaccharide+&+Polyphenol+Complex+Plant+RNA+Kit+多糖多酚复杂植物RNA快速提取试剂盒.pdf

产品信息

产品描述

产品组分：

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

储存事项:

1.试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃）进行

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品特点：

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.简捷，单个样品操作一般可在25分钟内完成。

3.适应性比较广泛，可以提取包括茶树、发财树、杉木、棉花、月季、拟南芥、杨树等各类植物。

4.多次柱漂洗确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀ 典型的比值高达 2.1～2.2，基本无 DNA 残留，

可用于RT-PCR，Northern-blot 和各种实验。

运输和保存方法：

1）本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2）试剂盒储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

使用前必读：

1、实验过程使用的离心机均可在4℃进行，转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机

2、需要自备乙醇、β-巯基乙醇和研钵。

3、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA残留或者RNA产量降低

4、Buffer RLT plus和Buffer RW1 plus中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、关于DNA的微量残留：

一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到 100%无残留），本公司的 RNA 提取产品，由于采取了本公司特殊的裂解液体系和离心管吸附柱技术，绝大多数 DNA 已经被清除，不需要 DNase 消化，可直接用于RT- PCR 和qPCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：

1)选用跨内含子的引物，以穿过 mRNA 中的连接区，这样 DNA 就不能作为模参与扩增反应。

2)选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。

3)在步骤Buffer RW1 plus漂洗一次后，直接在离心柱上进行 DNase I 柱上消化处理。购买 DNA 酶柱上消化试剂盒前可先索取具体操作说明书。

使用方法：

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer RPE plus，Buffer RW1 plus中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

→在使用前加入30μL β-巯基乙醇到1mL Buffer RLT plus中，含有β-巯基乙醇的裂解液可在室温下保存长达1个月。

1、柱平衡：向吸附柱中加入100μL的平衡液，12000rmp离心1min,弃滤液，柱子备用。

2、称量200mg左右的新鲜植物样品

3、迅速将称量好的组织样品放入液氮中，用研钵和研杵彻底研磨成粉末状，把样品粉末装入用液氮预冷的2mL离心管中，待液氮挥发后迅速进入步骤4.（保持冷冻状态，尽量不要让组织融化）

4、加入600μL buffer RLT plus缓冲液，裂解3min，放入离心机4℃ 1200rpm离心15s。

5 、 组装好 gDNA 清除柱和收集管 ，将步骤 4 中的上清液全部添加到 gDNA 清除柱中 ， 12,000rpm 离心 2 min 。小心将收集管中的上清转移到新的离心管中（小心不要碰到收集管中的沉淀物） 。

6 、 向步骤 5 中获得的上清中加入 0.5 体积的无水乙醇 ， 并用枪头混匀 ，快速进入下一步骤 。  (该步骤可能会产生沉淀 ，不用在意 ，不会对实验有影响）

7 、 步骤 6 获得的溶液转移到RNA吸附柱和收集管中，盖好盖子，12,000rpm离心15s，弃废液 ，收集管重复使用。

8 、加入 500μL 的 Buffer RW1 plus到RNA吸附柱中 ， 盖好盖子 ，室温放置1min， 12,000rpm 离心 15s ，弃废液，收集管重复使用。

9、加入500μL的Buffer RW1 plus到RNA吸附柱中，盖好盖子，12,000rpm 离心 15s，弃废液，收集管重复使用。

10、加入 500μL Buffer RPE plus到RNA吸附柱中 ，盖好盖子，12,000rpm离心 15s ，弃废液 ，收集管重复使用。

11、加入 500μL Buffer RPE plus到 RNA 吸附柱中 ， 盖好盖子 ， 12,000rpm 离心 2min （较长时间的离心 ，确保 RNA 洗脱过程中没有乙醇残留）

12、（该步骤为可选择步骤 ），将 RNA 吸附柱装填到全新的 2 mL 收集管中 ， 盖好盖子 ， 12,000rpm 离心 1 min ，可完全去除残留的 Buffer RPE plus。

13 、将 RNA 吸附柱放置到全新的 1.5 mL 离心管中 ， 向 RNA 吸附柱的膜中央加入 30-50μL 的无酶 水 ， 盖好盖子,冰上放置1min ，12,000rpm离心1min ，洗脱收集RNA。

说明 ：如果预期RNA产量＞ 30μg ，另外再加入30-50μL的无酶水到RNA吸附柱中 ，重复步骤13 ， 合并两次洗脱液；如果需要高浓度的RNA，建议将第一次的洗脱液加回到RNA吸附柱上 ,  重复步骤13。

洗脱两遍RNA的洗脱液的RNA浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15-30%，但是浓度要低 ，使用者根据需要进行选择。

注：60℃预热RNase-free H₂O可提高回收产量。

附：DNA酶柱上消化步骤

1、按照试剂盒步骤操作，直到完成步骤7。

2、取45μL DNase I buffer和5μL DNase I酶在离心管中轻轻吹打混匀成工作液（如果样品比较多，请按照比例放大配制工作液）。

3、向离心柱中加入500μL Buffer RW1 plus到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心30s，弃废液，收集管重复使用

4、向离心柱中加入80μL的DNase I工作液，冰上放置15min。注意：直接将工作液加入到膜的中央，溶液会自动扩散到四周。不要滴加到管壁或者其他无法接触到膜的位置。

5、向离心柱中加入500μL的Buffer RW1 plus，盖好盖子，12,000rpm离心30s，弃废液，收集管重复使用。

6、接着按照步骤10完。

注意：本产品仅作科研用途！