• 说明书丨HRN0321-植物RNA快速提取试剂盒+.pdf

产品信息:

产品描述：

    本试剂盒采用了特殊的离心吸附柱和缓冲液体系，可以从植物组织中快速提取总RNA。只要25min左右即可完成提取，操作简单，使用方便。提取出的总RNA不含有蛋白和其他杂质，纯度极高。

   本植物RNA快速提取试剂盒通用型强，兼容性好，可广泛使用于各类植物样本的提取。目前已验证可用于提取拟南芥、玉米、西红柿、烟草、棉花、月季、杨树等各类植物样本。    

产品组分：

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

储存事项:

1.试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃）进行

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品特点：

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.简捷，单个样品操作一般可在25分钟内完成。

3.适应性比较广泛，可以提取包括棉花、月季、拟南芥、杨树等各类植物。

4.多次柱漂洗确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀ 典型的比值高达 2.1～2.2，基本无 DNA 残留，

可用于RT-PCR，Northern-blot 和各种实验。

运输和保存方法：

1）本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2）试剂盒储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

使用前必读：

1、实验过程使用的离心机均可在4℃进行，转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机

2、需要自备乙醇、β-巯基乙醇或者DTT和研钵。

3、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA残留或者RNA产量降低

4、RLT、RLC和RW1中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、植物组织裂解是否充分直接影响到RNA 提取的质量和产量，本试剂盒中提供的裂解液RLT，主要成分为异硫氰酸胍，适用于大多数植物组织的裂解，但有些植物组织（例如玉米的乳白色胚乳）或丝状真菌，由于次级代谢产物较特殊，异硫氰酸胍使样品产生固化，导致RNA 无法提取，此时可以向我们索取另一种裂解液RLC，将解决该问题。

6、关于DNA的微量残留：

一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到 100%无残留），本公司的 RNA 提取产品，由于采取了本公司特殊的裂解液体系和离心管吸附柱技术，绝大多数 DNA 已经被清除，不需要 DNase 消化，可直接用于RT- PCR 和qPCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量 P

CR，我们建议在进行模板和引物的选择时：

1)选用跨内含子的引物，以穿过 mRNA 中的连接区，这样 DNA 就不能作为模参与扩增反应。

2)选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。

3)在步骤去蛋白液 RW1 漂洗前，直接在离心柱上进行 DNase I 柱上消化处理。购买 DNA 酶柱上消化试剂盒(货号：HRN0291)前可先索取具体操作说明书。

使用方法：

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer RPE，Buffer RW1中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

→在使用前加入   20μL  β-巯基乙醇 到 1 mL  Buffer  RLT 或  10μL  β-巯基乙醇 到 1 mL  Buffer   RLC   中   ，含有β-巯基乙醇的裂解液可在室温下保存长达1个月。

1、柱平衡：向吸附柱中加入100μL的平衡液，12000rmp离心1min,弃滤液，柱子备用。

2、称量不超过200mg的新鲜植物样品

3、迅速将称量好的组织样品放入液氮中，用研钵和研杵彻底研磨成粉末状，把样品粉末装入用液氮预冷的2mL离心管中，待液氮挥发后迅速进入步骤3.（保持冷冻状态，尽量不要让组织融化）

4、加 入  55 0μ L  buffer   RLT 缓 冲 液   ， 裂 解 3 min , 放 入 离 心 机 4℃ 12 00 rpm离心15 s。

5  、 组装好  gDNA 清除柱和收集管   ， 将步骤  4   中的上清液全部添加到   gDNA 清除柱中   ，

12 , 000rpm 离心  2  min 。 小心将收集管中的上清转移到新的离心管中 （小心不要碰到收集管中的沉淀物） 。

6  、   向步骤   5 中获得的上清中加入  0.5  体积的无水乙醇   ， 并用枪头混匀   ，快速进入下一步骤 。 (该步  骤可能会产生沉淀   ， 不用在意   ， 不会对实验有影响）

7  、  步骤   6 获得的溶液   转移到RNA吸附柱和收集管中，   盖好盖子   ， 12, 000rpm离心  15s   ， 弃废液  ， 收集管重复使用。

8  、加入  500μL  的   Buffer   RW1  到RNA吸附柱中  ， 盖好盖子  ， 室温放置1min  12,000rpm 离心  15s，弃废液， 收集管重复使用。

9  、加入  500μL  的   Buffer   RW1  到RNA吸附柱中  ， 盖好盖子  ， 12,000rpm 离心  15s  ，弃废液  ， 收集管重复使用。

10、加入  500μL  Buffer  RPE 到RNA吸附柱中   ， 盖好盖子   ，12,000rpm  离心   15 s   ， 弃废液   ， 收集管重复使用。

11  、加入  500μL  Buffer  RPE 到  RNA  吸附柱中   ， 盖好盖子   ， 12,000rpm  离心   2 min （较长时间的离  心   ， 确保   RNA 洗脱过程中没有乙醇残留）

* 12  、该步骤为可选择步骤   ，将   RNA   吸附柱装填到全新的  2 mL 收集管中  ， 盖好盖子 ， 12, 000rpm  离心   1 min  ， 可完全去除残留的   Buffer   RPE。

13  、将  RNA  吸附柱放置到全新的  1.5 mL 离心管中 ，向  RNA  吸附柱的膜中央加入  30-50μL  的无酶  水   ， 盖好盖子，冰上放置1min   ，12,000rpm 离心  1 min   ，洗脱收集  RNA。

说明  ： 如果预期RNA  产量  ＞ 30μg   ， 另外再加入   30-50μL   的无酶水到RNA吸附柱中， 重复步骤   13 ，合并两次洗脱液；   如果需要高浓度的   RNA  ， 建议将第一次的洗脱液加回到   RNA   吸附柱上 ,   重复步骤  13。

洗脱两遍   RNA  的洗脱液的   RNA 浓度高   ， 分两次洗脱合并洗脱液的   RNA 产量比前者高   15-30%，但是浓度要低   ， 使用者根据需要进行选择。

注：60℃预热RNase-free H2 O可提高回收产量。

附：DNA酶柱上消化步骤

1、按照试剂盒步骤操作，直到完成步骤7。

2、取45ul DNase I buffer和5μL DNase I酶在离心管中轻轻吹打混匀成工作液（如果样品比较多，请按照比例放大配制工作液）。

3、向离心柱中加入500μL Buffer RW1到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心30s，弃废液，收集管重复使用

4、向离心柱中加入50μL的DNase I工作液，室温（20-30℃）放置15min。注意：直接将工作液加入到膜的中央，溶液会自动扩散到四周。不要滴加到管壁或者其他无法接触到膜的位置。

5、向离心柱中加入500μL的Buffer RW1，盖好盖子，12,000rpm离心30s，弃废液，收集管重复使用。

6、接着按照步骤10完.

注意：本产品仅作科研用途！

实验结果：

图1.使用植物RNA快速提取试剂盒，提取60mg杉木叶片样本的电泳图