• 说明书丨HRF0221-Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 小鼠组织直接PCR试剂盒.pdf

产品信息

产品描述

本试剂盒可直接快速地对小鼠组织（如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肌肉等）样本进行PCR扩增，具有极强的样本兼容性。本试剂盒配备了强力的裂解缓冲液，可以快速裂解样品，释放基因组DNA。裂解液可以直接加入到PCR反应体系中，无需精提纯化，操作方便。此外，本试剂盒对样品投入量要求低，1-2mm的鼠尾或者5 mg小鼠组织即可进行实验。

本试剂盒提供的2× Mouse Direct PCR Mix为2倍浓度的PCR反应液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。扩增产物可直接上样电泳。

该试剂盒可用于转基因鉴定、小鼠基因分型等。

适用范围

鼠尾、动物组织（哺乳动物，海洋动物，昆虫等）、细胞等。

产品组分

a)Buffer T1 为裂解缓冲液，包含了强力蛋白变性剂，请戴手套操作。

b)Buffer T2 为终止缓冲液，用以终止Buffer T1的裂解功能。

c)2× Mouse Direct PCR Mix：包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl²⁺、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂、稳定剂和电泳指示染料等。

运输方法

冰袋运输。

保存方法

组分A：2-8℃保存，有效期1年。使长时间多次使用，请分装冻存，避免交叉污染。

组分B/C：-20℃保存，避免反复冻融。有效期1年。

操作方法

PCR反应鉴定——鼠尾基因组DNA释放

1. 取75 μL裂解液Buffer T1于0.2 mL PCR薄壁管中。然后加入1-2mm的鼠尾或者5 mg小鼠组织（切记不可多加，多加可能会抑制下游PCR），样品浸没在裂解液Buffer T1内；

2. 98 ℃裂解30 min（建议PCR仪上操作），也可以根据情况裂解时间在10min-60min内调整；

3. 取出PCR薄壁管迅速放冰上，加入75μl Buffer T2，混匀，即可直接用做PCR模板或置于4℃或-20℃保存；

4. 选做步骤：12,000 rpm离心2 min；

5. 选做步骤：将上清转移至新的0.2 mL PCR薄壁管，4℃或-20℃保存或直接取上清用于后续PCR扩增。

【注】：组织应尽量剪碎，以便裂解反应更顺利进行。

【注】：98℃孵育，一般30 min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难裂解，可将时间延长至60 min。组织块不需完全裂解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

PCR反应鉴定——PCR反应体系

【注】：各组分使用前应充分混匀。

a）模板使用量：建议按1-10%总体系量取用模板，20 μL体系建议采用1 μL上清液作为模板；

b）引物终浓度：0.2-0.4 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度；

c）反应体系：推荐使用20 μL，也可根据使用习惯调整体系体积大小；

d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

PCR反应鉴定—PCR反应条件

【注】：a）退火温度：请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃。

   b）延伸时间：请按1 kb/min设定。

   c）电泳上样：取3-5 μL扩增产物上样即可。

对照反应

      在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

注意事项

1.为了避免样本间交叉污染，每次取样后都需要将取样器材的刃口或与样本直接接触的部位浸入2%次氯酸钠溶液中，反复洗刷数次，然后用干净的纸巾擦干残余液体后再进行使用。为了试验方便，也可准备多个取样器材，在使用完后进行统一清洗，确保每一单独样本均使用的是无污染的取样器材。

2. 建议使用新鲜的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。
3. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率最佳。

4.如果扩增条带较弱，可以适当增加或者减少模板加入量，裂解混合物模板一般可以在1μl-4μl内调节。

5.如果非特异扩增较多，可调整退火温度，或者适当增减模板用量。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
7. 本产品仅作科研用途！