• 说明书丨HRF0221-Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 小鼠组织直接PCR试剂盒.pdf

产品信息

产品描述

本试剂盒可直接快速地对小鼠组织（如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肌肉等）样本进行PCR扩增，具有极强的样本兼容性。本试剂盒配备了强力的裂解缓冲液，可以快速裂解样品，释放基因组DNA。裂解液可以直接加入到PCR反应体系中，无需精提纯化，操作方便。此外，本试剂盒对样品投入量要求低，5 mg小鼠组织或1-5 mm鼠尾即可进行实验。

本试剂盒提供的2× Mouse Direct PCR Mix为2倍浓度的热启动PCR反应液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。

该试剂盒可用于转基因鉴定、小鼠基因分型等。

产品组分

a)Buffer ML 为裂解缓冲液，包含了强力蛋白变性剂，请戴手套操作。

b)Buffer MT 为终止缓冲液，用以终止Buffer ML的裂解功能。

c)2× Mouse Direct PCR Mix：包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂、稳定剂和电泳指示染料等。

运输方法

冰袋运输。

保存方法

组分A：2-8℃保存，有效期1年。使长时间多次使用，请分装冻存，避免交叉污染。

组分B/C：-20℃保存，避免反复冻融。有效期1年。

操作方法

样品基因组DNA释放

1. 剪取5-10 mg动物组织或1-5 mm鼠尾，置于1.5 mL离心管中；

2. 在上述离心管中加入90 μL Buffer ML，轻轻涡旋使得样品完全被裂解液浸润，短暂离心；

3. 在恒温孵育仪中设置95℃孵育15 min；

4. 加入10 μL Buffer MT，轻弹混匀，终止裂解;

5. 选做步骤：12000 rpm离心2 min；

6. 将上清转移至新的离心管，4℃或-20℃保存或直接取上清用于后续PCR扩增。

【注】：组织应尽量剪碎，以便裂解反应更顺利进行。

【注】：95℃孵育，一般15 min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难裂解，可将时间延长至30 min。组织块不需完全裂解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

PCR反应鉴定——PCR反应体系

【注】：各组分使用前应充分混匀。

a）模板使用量：建议按1-10%总体系量取用模板，20 μL体系建议采用1 μL上清液作为模板；

b）引物终浓度：0.2-0.4 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度；

c）反应体系：推荐使用20 μL，也可根据使用习惯调整体系体积大小；

d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

PCR反应鉴定—PCR反应条件

【注】：a）退火温度：请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃。

   b）延伸时间：请按30 sec/kb设定。

   c）扩增循环数：35个循环已可以扩增足量产物。

   d）电泳上样：取3-5 μL扩增产物上样即可。

对照反应

      在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

注意事项

1.为了避免样本间交叉污染，每次取样后都需要将取样器材的刃口或与样本直接接触的部位浸入2%次氯酸钠溶液中，反复洗刷数次，然后用干净的纸巾擦干残余液体后再进行使用。为了试验方便，也可准备多个取样器材，在使用完后进行统一清洗，确保每一单独样本均使用的是无污染的取样器材。

2. 建议使用新鲜的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。
3. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率最佳。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途！