• 说明书丨HRK2911-脂质过氧化物(LP0)测试盒试剂盒.pdf

产品信息

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

    脂质过氧化是动植物体内活性氧(ROS)氧化生物膜的过程，脂质过氧化物（LPO）是脂质过 氧化过程的产物，即 ROS 与生物膜的磷脂、酶和膜受体相关的多不饱和脂肪酸的侧链及核 酸等大分子物质起脂质过氧化反应形成 LPO，使细胞膜的流动性和通透性发生改变,最终导 致细胞结构和功能的改变。因此，LPO 常被作为机体氧化应激的一种指标，与某些疾病的 病理过程，如肿瘤、化学中毒、感染、炎 症、自身免疫疾病、动脉粥样硬化（AS）及心脑 血管疾病，以及衰老等生理过程密切相关。

测定原理

    LPO 在酸性条件下加热，产生小分子终产物 MDA，MDA 与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid， TBA)缩合，生成红色产物，在 535nm 有最大吸收峰。

自备用品

分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 48mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 18mL×1 瓶，4℃保存。

LPO 提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

       细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （10 4 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

      组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤:

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长到 535 nm，蒸馏水调零。

2、在 EP 管中依次加入如下试剂

立即混匀，95℃水浴 40min 后，流水冷却。3000g 离心 10min，吸取 1mL 上清加入 1mL 玻璃 比色皿，测定 535nm 下各管吸光值，记作 A 测定和 A 空白。ΔA=A 测定-A 空白。

LPO 含量计算：

用玻璃比色皿的计算公式如下

y = 1.1446x - 0.0076，R2 = 0.9997，x 为标准品浓度 μmol/mL，y 为吸光度。

1、血清（浆）中 LPO 含量的计算：

LPO 含量(nmol/ mL)=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V 标÷V 样×1000

                             =873.6×（ΔA+0.0076）

2、细菌、细胞或动物组织中 LPO 含量计算

（1）按照蛋白浓度计算

LPO 含量(nmol/ mg prot)=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V 标÷(Cpr×V 样)×1000

                                   =873.6×（ΔA+0.0076）÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

（2）按照样品质量计算

LPO 含量(nmol/g 鲜重)=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V 标÷(W ×V 样÷V 样总)×1000

                                =873.6×（ΔA+0.0076）÷W

(3 ) 按照细菌或细胞密度计算：

LPO 含量(nmol/10 4 )=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V 标÷(500×V 样÷V 样总)×1000                                                           =1.747×（ΔA+0.0076）

V 标：标准曲线中加入标品体积，0.06mL；V 样：加入样本体积，0.06mL；V 样总：加入 提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌 总数，500 万；1000，μmol 到 nmol 换算系数。

注意事项

1、临用前注意试剂二是否完全溶解，如未溶解，可以 70℃-90℃加热，并振荡以促进溶解。

2、本产品仅作科研用途！