• 说明书丨HRR0566-血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒.pdf

产品信息:

产品简介：

     本试剂盒应用特殊的裂解条件释放组织切片中的DNA，克服了福尔马林交联造成的抑制效应。该试剂盒通过特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，将高品质的DNA纯化至小洗脱体积中。FFPE DNA提取提取的基因组完整性好，纯度高，质量稳定可靠。

包埋样本在固定包埋过程中DNA发生断裂交联，提取困难，易降解。本试剂盒针对于石蜡样本特点设计的基因DNA提取试剂盒，能快速稳定的获得高质量FFPE样本DNA。

     本试剂盒提取的FFPE DNA可适用于多种下游应用，如PCR、real-time PCR、 SNP基因分析STR基因分析和药物基因组学研究。

储存事项：

1）本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2）试剂盒储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品特点：

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.可从福尔马林固定、石蜡包埋组织，福尔马林等固定液中的组织中分离纯化基因组DNA。

3.轻松提取纯化高品质，高得率的即用型DNA，结果重复性好。

4.彻底去除污染物和PCR抑制剂。

产品组分：

使用前必读：

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机。

2、需要自备异丙醇。

3、开始实验前根据需要将水浴预热到 37℃或者 70℃备用。

4、Buffer BB和Buffer IR中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、洗脱液Elution buffer不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是

EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

使用方法：

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer IR，Buffer WB中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

1、将组织切片放入离心管中，浸泡在二甲苯中脱蜡约30分钟（具体时间根据切片厚度调整）。

2、将切片依次放入100%乙醇-80%乙醇-60%乙醇-40%乙醇-去离子水，每个液体中浸泡10秒钟重新水化切片。

     刚放入100%乙醇时，应该可见到切片变白。

3、显微镜观察下，用刀片切下拟提取 DNA 的目标组织，放入预先称重的1.5ml 离心管。再次称重，计算出切片组织重量。

4、在25-50mg组织中加入200μl裂解液Buffer TLB，再加入20μl的蛋白酶K溶液（20mg/ml），立即混匀混匀后置 37℃水浴过夜。

5、再加入10μl 的蛋白酶 K 溶液（20mg/ml），混匀后 55℃水浴1-2小时。

此步骤后，不应该见到粗大的组织颗粒了。

6、加入200μL结合液Buffer BB，立刻涡旋振荡20秒充分混匀后置70℃水浴10分钟。

7、冷却后加入100μL异丙醇，立刻涡旋振荡30秒充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

8、用1mL的枪头吸取混合物，将混合物加入一个吸附柱中，吸附柱放入收集管中，12,000rpm 离心60秒，倒掉收集管中的废液。

如果有不溶组织物可能堵住枪头，可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物；如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去，该做法是为了去除不溶物，以免堵塞离心柱。

9、加入500μL抑制物去除液Buffer IR，12,000rpm离心30秒，弃废液。

10、加入600μL漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

11、加入600μL漂洗液Buffer WB，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

12、将吸附柱放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

13、取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液Elution buffer（洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好），室温放置3-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

14、以上步骤获得的DNA 可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。

附：另外一种脱蜡方式

1、将目标组织切片放入离心管，加入 1ml 100%二甲苯，涡旋振荡10秒。瞬间离心把组织全部浸入到二甲苯。

2、50℃水浴3分钟熔解石蜡，20-25℃最高速离心2分钟，收集组织到管底。

3、小心用移液器吸弃上清二甲苯，注意不要吸到沉淀。

4、加入1ml无水乙醇，涡旋振荡，最高速离心2分钟，小心吸弃上清乙醇。

5、加入1ml无水乙醇，重复步骤4一遍，尽可能吸弃所有乙醇。

6、室温或者37℃晾干乙醇10分钟或直到所有乙醇挥发干。

产品仅用于科研等非医疗用途！

问题与解决方法